小鼠腦組織勻漿測定SOD、羥自由基的問(wèn)題？

發(fā)布時(shí)間：2014/2/8 10:04:48　瀏覽次數：9542　[字號：大 中 小]　 [關(guān)閉此頁(yè)　打印此頁(yè)]

我采用的是連續波長(cháng)的酶標儀

1. 測SOD用的是1%的小鼠腦組織勻漿100ul進(jìn)行測定的，波長(cháng)按說(shuō)明書(shū)的550nm，加200ul到96孔板測定的，預實(shí)驗時(shí)用了60、80、100ul三個(gè)劑量，也都是測到負值，把負值變正后，100ul的百分抑制率在15-55%之間。所以都用了100ul的。我測的對照管OD 0.19，而測定管OD都比這個(gè)值大。

2.羥自由基測定時(shí)因為試劑量有限，按照師兄之前做的經(jīng)驗，也是取的1%的小鼠腦組織勻漿。測的標準空白管OD 0.30左右，標準管OD 0.53左右，請問(wèn)和貴公司以往結果是否相符，另外能否給我一個(gè)對照管的OD，因為當時(shí)試劑污染了，沒(méi)有測到。

3.考馬法測蛋白也是取的1%的組織勻漿，還稀釋標準品后做了標準曲線(xiàn)的，空白是0.212，0.563g/L標準液0.27，出現負值的OD值介于0.16-0.20.酶標儀取的波長(cháng)是595nm，我將樣本、標準及試劑均減半量，最后96孔板也是取的200ul。膽堿酯酶也是取的1%組織勻漿，測定OD值在0.30左右，對照管OD值小于這個(gè)值。酶標儀選擇波長(cháng)520nm，取樣量也都減半，最后96孔板都取200ul。

回復：

查我們檢測記錄，羥自由基對照管一般吸光度在0.7-0.8！1cm光徑測定，標準與標準空白的差值一般在0.4多，老師用200微升上96孔板，比色光徑在0.5cm左右，所以您的差值在0.2多還是可以的！SOD和考馬可以放到一起考慮，查我們檢測記錄，1%腦組織勻漿，蛋白濃度一般在0.3-0.4g/L左右，同時(shí)SOD則取50微升左右測定；但是現在老師的情況是，用1%的勻漿，蛋白濃度還有部分是負值，測定不出，那說(shuō)明樣本中總蛋白濃度也偏低，相應的其中SOD活性肯定也會(huì )降低！這種情況下，SOD和蛋白濃度測定，都需要加大濃度來(lái)進(jìn)行檢測?。槺銌?wèn)下，老師測定所用的勻漿上清是當天制備的還是保存的？）CHE測定，用1%勻漿濃度太低了，老師應該用10%勻漿測定一下！ 

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