成骨誘導測定ALP問(wèn)題？

發(fā)布時(shí)間：2014/2/8 10:20:15　瀏覽次數：4734　[字號：大 中 小]　 [關(guān)閉此頁(yè)　打印此頁(yè)]

我想咨詢(xún)幾個(gè)問(wèn)題： 

（1）我做成骨誘導測ALP活性，應該是測培養基上清的ALP還是細胞內的ALP？

（2）測細胞內ALP的話(huà)如何裂解細胞提蛋白？

（3）是否需要測上清或細胞內總蛋白濃度進(jìn)行標準化？

回復：

從我們這邊接觸的樣本測定來(lái)說(shuō)，測定細胞中ALP活力相對比培養液中的要好一些；比較細胞代謝方面優(yōu)于培養液，只有當細胞破碎或者透性增大，才會(huì )釋放到培養液中。

細胞樣本需要進(jìn)行破碎處理，推薦方法物理破碎，如勻漿、超聲等；化學(xué)裂解法建議選擇相對溫和的裂解液；成分不宜過(guò)于復雜，防止成分的干擾。

測定細胞中ALP需要盡心蛋白定量；如果是培養液，則不需要進(jìn)行蛋白定量。

 

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